日期

活動重點及目的

109年9月19日(六)

1.培育具備分析與建構重組蛋白之生醫人才，以提高其藥物標的篩選之能力。

2.講解冠狀病毒及登革熱病毒造成之危害及現今小分子藥物市場需求。

3.說明實驗操作流程及其注意細項。

109年9月20日(日)

1.推廣及培育藥物篩選之專業人員。

2.講解各類勝任細胞之培養試劑與其質體載量及特性。

3.建立重組蛋白穩定表現之勝任細胞(接續昨天實驗)。

109年9月26日(六)

1.推廣及培育藥物篩選之專業人員。

2.講解各類調控組之機轉及西方墨點法。

3.操作西方墨點法及驗證重組蛋白之正確性。

109年9月27日(日)

1.培育具備分析與建構重組蛋白之生醫人才，以提高其藥物標的篩選之能力。

2.講解重組蛋白之大量生產條件之優化。

3.操作重組蛋白生產系統。

109年10月17日(六)

1.培育具備分析與建構重組蛋白之生醫人才，以提高其藥物標的篩選之能力。

2.講解重組蛋白之純化條件之優化。

3.操作重組蛋白純化系統。

109年10月18日(日)

1.培育具備分析與建構重組蛋白之生醫人才，以提高其藥物標的篩選之能力。

2.講解重組蛋白之活性檢測。

3.操作探針活性之儀器檢測分析。

109年10月24日(六)

1.培育具備分析與建構重組蛋白之生醫人才，以提高其藥物標的篩選之能力。

2.講解化合物來源。

3.抑制劑EC50之測試。

109年10月25日(日)

1.培育具備分析與建構重組蛋白之生醫人才，以提高其藥物標的篩選之能力。

2.介紹細胞來源。

3.抑制劑CC50之測試。

109年10月27日(二)

1.培育具備分析與建構重組蛋白之生醫人才，以提高其藥物標的篩選之能力。

2.整理數據。

3.結案報。

日期

活動重點及目的

109年9月19日(六)

1.今日課程由研究生-黃奕中進行解說實驗原理及碩鴻協助操作流程從基因建構開始執行。

2.建構pET 22b(+)載體進行訊號序列 pelB 利用 Bgl2 及EcoR1 限制內切酶將其更換至pelB cys。

3.將建構質體轉殖入 BL-21 E.coli 勝任細胞，並用微珠將菌塗至含有 Amp 抗生素的 LB洋菜膠盤上於 37 培養 12小時後，進行保存。

4.各小組討論執行問題。

5.明日研究預習。

109年9月20日(日)

1.將昨日培養之細菌已IPTG進行蛋白表現之誘發，並分析其3CL之表現量在誘導前及不同誘導時間點之表現量。

2.進行SDS PAGE之配置。

3.進行SDS PAGE之染色。

4.進行SDS PAGE之分析。

5.確認重組蛋白分子量。

109年9月26日(六)

將上禮拜樣品進行SDS page之分析及抗體專一性分析。

1.學習轉染技巧。

2.指導抗體之運用。

3.抗體保存液之配置。

4.呈色之方式。

5.影像之分析。

109年9月27日(日)

1.測試大量生產菌液之(rpm)搖速對產量之影響。

2.測試大量生產菌液之溫度對產量之影響。

3.測試大量生產菌液之誘導物濃度對產量之影響。

4.在不同測試條件比較分析/計算勝任細胞數。

5.確認最佳重組蛋白生產條件。

109年10月17日(六)

1.配置純化試劑。

2.測試清洗劑之濃度對純化之影響。

3.測試清洗體積對純化之影響。

4.測試洗脫劑對純化之影響。

5.確認最佳重組蛋白純化條件。

109年10月18日(日)

1.測試不同蛋白質濃度的催化效率。

2.測試不同探針濃度對呈色之影響。

3.計算催化效率。

4.分析催化結果。

5.確認分析儀器操作。

109年10月24日(六)

1.測試1-20號化合物抑制能力。

2.測試20-30號化合物抑制能力。

3.計算抑制效率。

4.分析抑制結果。

5.確認分析儀器操作。

109年10月25日(日)

1.測試1-20號化合物細胞毒性。

2.測試20-30號化合物細胞毒性。

3.計算細胞毒性。

4.分析細胞毒性結果。

5.確認分析儀器操作。

109年10月27日(二)

1.確認各組學員學習成果。

2.討論各組學員學習成果。

3.各組學員學習成果報告。

4.海報報告。

5.確認9及26號化合物之潛力。

日期

學生表示

學生提問

回覆

109年9月19日

課程除了豐富知識與實驗細節的補充外，也特別提了實驗小技巧，並瞭解市場需求及藥物篩選之重要性。受益良多，希望能多舉辦此類深具意義的授課活動。

109年9月20日

課程內容淺顯易懂結合理論與實際操作更加印象深刻。

Q.使用不同濃度(%)膠體的差異?

A.低濃度膠體能提高大分子量重組蛋白之解析度;低濃度則反之。

109年9月26日

相較於SDS PAGE染色，西方墨點法對於重組蛋白專一性辨識性更高，所以西方墨點法似乎是更好的分析方式。

Q:西方墨點法是否能取代SDS PAGE染色?

A:在此次實驗中是無法取代的，因要兩者要回答實驗的問題是不盡相同的

109年9月27日

大量生產蛋白似乎不能只單靠將勝任細胞數提升而增加產量。

Q:大量生產重組蛋白是否有其他儀器可代勞?

A:有的，可使用發酵槽進行溫度、攪拌速率及進氣量提供勝任細胞最佳生長條件，以提升

重組蛋白生產量。

109年10月17日

純化後重組蛋白量似乎會下降很多及稍微變性。

Q:如何同時保有高蛋白產量及純度嗎?

A:1.提升純化系統之負載量。2.使標的蛋白具有數種高度特異性與能其他蛋白分離,即可達到上述目的。

109年10月18日

催化反應時間也會影響最後呈色結果。

Q: 催化過程是否會影響酵素的生物活性?

A:理論上ES會形成E+P,兩者會分開,故酵素活性應不影響,然而酵素最適反應溫度並不同於最佳保存溫度,所以在長期反應溫度下還是有可能會失活。

109年10月24日

抑制劑的來源及結構可分為三大類,可藉此找尋相關性。

Q: 抑制劑本身顏色是否影響分析結果?

A:不會； 1.會稀釋後使用。2.有控制組。

109年10月25日

同一類抑制劑的細胞毒性濃度類似，似乎有相同結合點。

Q:1-30化合物中毒性較高的6及14號是否有持續開發之意義?

A:建議以高抑制能力且低細胞毒性之9及26號往下開發。

109年10月27日

很高興能將成果進行發表展示。

Q: 9及26化合物之後續研究為何?

A:進行QSAR及病毒斑測試確認其抑制能力。

非常同意

同意

尚可

不同意

非常不同意

1.活動內容符合個人需求

78%

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2.對授課內容充實豐富感到滿意

74%

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3.對講員的表達能力感到滿意

22%

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4.對本次教學方式(如互動)感到滿意

36%

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5.對本活動時間、地點與行政安排感到滿意

72%

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6.整體而言，我對本次活動感到滿意

71%

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7.能依據教學目標，設計能引導學生學習的課程內容與教學活動

是:95% (19人)

8.能運用多元的教學方法，啟發學生思考與討論，並促進學生課堂參與

是:80% (16人)

9.能引發學生自主學習，或能幫助學生延伸課程相關之閱讀或活動

是:80% (16人)

10.未來舉辦本系統活動，是否會推薦其他人參與

是:95% (19人)

非常同意

同意

尚可

不同意

非常不同意

1.活動內容符合個人需求

88%

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2.對授課內容充實豐富感到滿意

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3.對講員的表達能力感到滿意

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4.對本次教學方式(如互動)感到滿意

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5.對本活動時間、地點與行政安排感到滿意

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6.整體而言，我對本次活動感到滿意

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7.能依據教學目標，設計能引導學生學習的課程內容與教學活動

是: 80% (16人)

8.能運用多元的教學方法，啟發學生思考與討論，並促進學生課堂參與

是:85% (17人)

9.能引發學生自主學習，或能幫助學生延伸課程相關之閱讀或活動

是: 95% (19人)

10.未來舉辦本系統活動，是否會推薦其他人參與

是: 90% (18人)